TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（DAB顯色法）

更新日期：2023-12-14

訪問量：6288

廠商性質：生產廠家

所在城市：上海市

簡要描述：

細胞凋亡時，部分DNA內切酶會被激活，進而切斷基因組DNA。TUNEL （TdT mediated dUTP Nick End Labeling）細胞凋亡檢測試劑盒可以用來檢測組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA的斷裂情況。

產品介紹：

品牌	其他品牌	供貨周期	現貨
應用領域	醫療衛生,生物產業

其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基（3′-OH）末端摻入生物素（Biotin）標志的dUTP，隨后通過Biotin與連接辣根過氧化酶的鏈霉親和素（Streptavidin-HRP）特異結合，在辣根過氧化酶底物二氨基聯苯胺（DAB）的存在下，產生深棕色的不溶物，從而特異準確地定位凋亡的細胞。

本試劑盒可用于石蠟切片、冰凍切片和細胞樣本（細胞涂片或爬片）的凋亡原位檢測，檢測結果可在普通光學顯微鏡下直接觀察計數。
包裝清單：

產品編號	產品名稱	包裝1	包裝2
SJ1271	TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（DAB顯色法）	20T	50T
●	說明書	一份

產品組成：

編號	組分	20T	50T	儲存條件
試劑（A）	50× Proteinase K	20 ul	100 ul	-20℃
試劑（B）	10 × DNase I Buffer	100 ul	500 ul	-20℃
試劑（C）	DNase I	20 ul	100 ul	-20℃
試劑（D）	Equilibration Buffer	2 ml	10 ml	-20℃
試劑（E）	5×TdT Enzyme Buffer	200 ul	1 ml	-20℃
試劑（F）	Recombinant TdT Enzyme	20 ul	100 ul	-20℃
試劑（G）	Biotin-11-dUTP	20 ul	100 ul	-20℃
試劑（H）	dATP	20 ul	100 ul	-20℃
試劑（I）	Streptavidin-HRP	20 ul	100 ul	4℃
試劑（J）	DAB-A solution	1 ml	5 ml	-20℃
試劑（K）	DAB-B solution	50 ul	250 ul	-20℃

保存條件：

Streptavidin-HRP, 4℃, 其余試劑-20 ℃保存，一年有效。

操作步驟：

1、樣本處理：

a) 石蠟切片：經二甲笨、酒精脫蠟，復水。脫蠟應充分。

b) 冰凍切片：流水沖洗，去除OCT包埋膠后，用純水洗3次。

c) 細胞飛片：用組織固定液固定后，用PBS洗三次，每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘，用PBS洗三次，每次5分鐘。

2、蛋白酶消化

將1ul 試劑（A）50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中，滴加到組織上，37℃孵育10-20分鐘。消化結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。

3、封閉

用3%的雙氧水（H2O2）室溫封閉10分鐘，封閉結束后用PBS洗三次，每次5分鐘。

4、陽性對照組織的處理

將組織用DNase I消化，以獲得斷裂的DNA，即成Tunel染色陽性的對照。陽性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。

純水	46 ul
試劑（B）: 10 × DNase I Buffer	5 ul
試劑（C）: DNase I	1 ul
共計	50 ul

將50 ul DNase I消化液滴加于組織上，37℃孵育10-30分鐘，消化結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。

5、連接:

連接反應前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過程中按下表配制連接工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后，直接滴加50ul 連接工作液，37℃孵育1-2小時，染色結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。

試劑（D）Equilibration Buffer	37 ul
試劑（E）5×TdT Enzyme Buffer	10 ul
試劑（F）Recombinant TdT Enzyme	1 ul
試劑（G）Biotin-11-dUTP	1 ul
試劑（H）dATP	1 ul
共計	50 ul